Base蛋白純化儀操作全解析，從樣品上樣到目標蛋白收獲的標準化流程指南

更新時間：2025-08-26

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　　在生物制藥與生命科學研究中，蛋白純化是獲取高活性目標產物的核心環節。Base蛋白純化儀憑借其智能化控制系統與模塊化設計，成為實驗室高效分離蛋白的得力工具。本文將系統梳理其標準化操作流程，助您快速掌握從樣品準備到蛋白收集的全鏈條技術要點。

　　一、預處理階段：構建純凈的分離起點

　　1.樣品澄清處理

　　將細胞裂解液或發酵液以12,000×g離心30分鐘，去除細胞碎片與沉淀。對于膜蛋白等難溶目標物，可添加0.5% Triton X-100輔助溶解，同時需通過0.22μm濾膜過濾，防止顆粒物堵塞層析柱。

　　2.緩沖液配制驗證

　　根據目標蛋白等電點（pI）選擇離子交換層析模式：若pI<7，優先采用陰離子交換（Q柱）；若pI>7，則選用陽離子交換（SP柱）。使用pH計與電導率儀雙重校準緩沖液，確保pH偏差≤±0.1，電導率波動<5%。

　　二、儀器設置：精準調控分離參數

　　1.系統初始化校準

　　啟動Base軟件后，依次執行泵流速校準、紫外檢測器波長驗證及壓力傳感器歸零操作，確保基線穩定性≤±0.5mAU。

　　2.層析柱平衡程序

　　設置平衡緩沖液（Buffer A）流速為柱體積的1/10，持續沖洗3-5個柱體積，直至電導率與pH值穩定。此階段需密切觀察壓力變化，若超過0.3MPa需立即停泵檢查。

　　三、分離純化：動態優化目標蛋白回收

　　1.梯度洗脫策略

　　對于離子交換層析，采用線性梯度洗脫，梯度時間設定為10-15個柱體積。若目標蛋白與雜質分離度不足，可切換為階梯式洗脫。

　　2.實時監測與分步收集

　　通過軟件設置紫外吸收閾值（通常為50mAU），當洗脫峰超過閾值時自動觸發分步收集。對于疏水相互作用層析（HIC），建議在峰頂出現后延長收集時間2個柱體積，確保目標蛋白全部洗脫。

　　四、后處理與維護：保障設備長效運行

　　1.層析柱再生處理

　　純化結束后，依次用2M NaCl（高鹽沖洗）、0.1M NaOH（堿洗）與去離子水（中和）各沖洗2個柱體積，最后以20%乙醇保存。定期使用SDS-PAGE檢測柱效，當分辨率下降15%時需進行再生或更換。

　　2.系統清洗消毒

　　拆卸層析柱后，用1M NaOH循環清洗管路30分鐘，隨后以去離子水沖洗至pH中性。對于核酸污染風險高的樣品，可增加0.1% DEPC處理步驟，滅活RNA酶活性。

　　結語

　　Base蛋白純化儀的操作精髓在于"預處理精細化、參數動態化、維護周期化"。通過嚴格執行上述流程，實驗室可實現目標蛋白純度>95%、回收率>80%的穩定產出，為結構生物學研究、抗體藥物開發等高級應用提供可靠保障。